家禽病料采集和送检要点
时间:2019-04-19      作者:华南生物-仲书官

  当前家禽疾病流行情况比较复杂,混合感染和继发症比较多见,临床症状和病理变化也是非典型的多,所以实验室诊断是动物疾病诊断的重要措施。同时,对病原跟踪进行监测,能了解到疾病的流行动态。采样的部位、方法、样品的保存、运输都直接关系到最终的诊断结果,本文就家禽的病料采集小结了一些采集的原则及方法,仅供参考。


1 病料采集的原则

1.1 无菌采集

采集病料,应全程无菌操作。特别是,微生物检查、血清学检查涉及的样本。无菌采集的样品,使用的器械、容器等严格消毒处理,严格遵守相应的无菌操作流程。

为了进行病原体的分离, 病料应尽可能减少污染。 因此, 在尸体剖检前, 应将尸体浸泡在适宜消毒剂溶液中,既了皮肤和羽毛的消毒又减少在剖检时羽毛和皮屑飞扬对病

料的污染。尸体剖检时需先采集样品,后剖检,以免人为污染。

1.2 典型性

选取家禽的典型性,家禽要未经药物治疗,发病症状典型有代表,此要求对细菌传染性疾病的检查尤为重要。

选取病料有典型性,尽可能多的含有病原体。准备采集病料前,需初步诊断可能感染的病害,侧重采集病原体常侵害部位。

1.3 适时性

根据检测要求及检测对象和检验项目的不同, 适当的采样时机,对检测结果很重要,因此样品采集有时间上要求,应严格按规定的规程时间范围取样

采集病料时间,把握得当。从鸡的尸体上取材料时,夏天不应迟于6--8h,冬季不应迟于12--24h。时间过长的,可能会导致病料组织腐烂,难以检出应有的病原。必要时,应急宰早期发病的活体组织,自其身上获取病料组织。

尸体剖开腹腔时,第一时间采取病料,减少病料因暴露于空气中而造成的污染。

病料采集后, 如不能立刻进行检验, 应立即存放在冰箱中。

1.4 安全采集

采集样本过程中,应注意操作的安全性,避免人员受感染,防治病原菌扩散,扩大感染面积。

2 病料的采集方法

2.1 组织和实质器官的采集

病料的采集必须采用无菌操作。心、肝、脾、肺和肾等实质性器官要在打开胸腹后第一时间采取,应注意的是,切取的组织应该包括病变部分及相邻的健康组织。剖开腹腔后,必须注意肠管的完整,防止剪破肠道致使肠内容物污染组织器官。采集肝脏时注意不要弄破胆囊,以免胆汁污染组织器官。

2.2 液体病料的采集

血液、胆汁、脓肿液、渗出物等液体病料,使用灭菌吸管或注射器,经烫烙部位吸取病变组织的液体,将病料注入灭菌的离心管中,封好送检。

2.3 全血的采集方法

用灭菌注射器自鸡的心脏或翅静脉采血 2-5 毫升,注入灭菌试管中。一般在血液中加入少量的抗凝剂( 5% 的柠檬酸钠或肝素)。无菌抽血后缓慢混匀。

2.4 血清的采集方法

用灭菌注射器自鸡的心脏或翅静脉采血 1-2 毫升,注入灭菌试管中(青霉素瓶)摆成斜面,待血液凝固血清析出后,将血清吸出注入另一个灭菌试管中,备用;简便方法为灭菌注射器采血后抽出一定的空间,斜放静置析出血清,将血清注入1.5ml 小离心管中。

              

3. 病料的保存和处理

3。1。 采集的样品应一种样品放入一个密封袋或容器,立即密封,防止样品损坏、污染和

外泄等意外发生。

3.2 装样品的密封袋或容器应贴上标签,标签要防止因冻结而脱落,标签标明采集的时间、地点、号码和样品名称,并附上发病、死亡等相关资料(纸质或电子版),尽快送实验室。

3.3 根据样品的性状检验要求的不同,作暂时的冷藏、冷冻或其它处理。

 

4 病料的运送

4.1 因缺乏解剖及采集样品的相关条件,需要运送整禽尸体时,用温和型消毒液稍稍打湿羽毛(若无温和型消毒剂可省,切不可使用具有腐蚀性消毒剂),装入双层防漏性好的塑料袋完整包装,运送。 如果需要长途运输,事先要整个尸体放入冰箱冰冻过夜。

4。2 装在密封袋或容器中的病料应先密封,然后装入泡沫箱或者冷藏瓶中运送。运送过程中严禁倾覆。

4.3 运送的病料必须标明:送检单位、地址、送检病料的品种、性别、日龄、种类、数量、死亡日期、送检日期、检验目的、送检者姓名,并附临床病例摘要(发病时间、死亡情况、临床症状、产蛋及饮食情况、免疫和用药情况等)。

4.4 运送病料时,一定注意病料要低温保存 (需足够多的冰袋或干冰),供病毒学检验的样品,数小时内要送到实验室,只作冷藏处理,超过数小时的要冷冻处理,可将样品放入-20℃冰箱内冻结后再装入有冰袋或干冰的厚泡沫箱或者冷藏瓶内运送。


5 鸡常见疫病的样品采集

5.1禽流感的样品采集、保存和运输

禽流感病毒主要在呼吸道粘膜细胞内增殖。

5.1.1  病禽的样品采集  ( 1 ) 至少从5只濒死禽采集样品。样品包括: 泄殖腔拭子和气管拭子各5; 气管和肺的混样 5肠管及内容物的混样5; 肝、脾、肾和脑等组织样品各5个。采集方法: ①泄殖腔棉拭子: 将棉拭子插入泄殖腔并旋转使粪便沾在拭子上放在运输缓冲液中。②气管棉拭子: 活鸡采样时将棉拭子插入活鸡的气管内轻轻擦拭气管壁并放入缓冲液中。死亡动物采气管样品时可在肺和气管离体情况下进行采集应将棉拭子插入较深部位用力擦拭并按上述方法将棉拭子放在运输缓冲液中。

③粪便样品: 可从活禽市场采取新鲜粪便用棉拭子沾取粪便并将采好的样品放在运输缓冲液中。( 2 ) 分别采集至少10个病鸡的血样。采集10只病禽的血样使用一次性采血器心脏或翅静脉采血每只禽采血样2-3 ml经离心或自然析出血清后将血清移到指形管中。封好口贴好标签。不同禽只的血样不能混合。

5.1.2 病死禽的样品采集 无发病禽时可从死亡不久的病禽采样采样要求同病禽。棉拭子单独放入容器容器中盛放含有抗菌素的p H值为7.0- 7.4 PBS 液。

5.2 鸡新城疫样品的采集、 保存和运输

新城疫病毒存在于病鸡所有器官、体液、分泌物和排泄物,以脑、脾和肺含毒量最高骨髓含毒时间最长。

样品: 眼分泌物、泄殖腔拭子、脾脏、气管粘膜、脑等。

  采取病料完成后,器械应先消毒再清洗,采取病料场地应彻底消毒,避免散播病原微生物,采集者用肥皂水洗涤再用消毒液洗手。要建立健全病料档案管理制度,详细记录病料采集、使用、保存和销毁情况。


附: 各种病料的采集部位

对于不同的疾病应采集不同的部位,不可盲目采集。列表中病料采集部位在前的表示发病时含毒量较高排位较前,采集病料应注意。